Abstract :
The development of simple and highly efficient strategies for genetic modifications is essential for postgenetic studies aimed at characterizing gene functions for various applications. We sought to develop a reliable system for Neisseria species that allows for both unmarked and accumulation of multiple genetic modifications in a single strain. In this work, we developed and validated three-gene cassettes named RPLK and RPCC, comprising of an antibiotic resistance marker for positive selection, the phenotypic selection marker lacZ or mCherry, and the counterselection gene rpsL. These cassettes can be transformed with high efficiency across the Neisseria genus while significantly reducing the number of false positives compared with similar approaches. We exemplified the versatility and application of these systems by obtaining unmarked luminescent strains (knock-in) or mutants (knock-out) in different pathogenic and commensal species across the Neisseria genus in addition to the cumulative deletion of six loci in a single strain of Neisseria elongata. Key words: Neisseria, deletion, gene, insertion, markerless Le developpement de strategies simples et hautement efficaces en matiere de modifications genetiques est essentiel pour les etudes post-genetiques visant a caracteriser les fonctions de genes en vue de diverses applications. Les auteurs ont cherche a developper un systeme fiable pour les especes de Neisseria qui permet a la fois l'obtention de transformants non marques et l'accumulation de multiples modifications genetiques dans une seule souche. Dans ce travail, ils ont developpe et valide des cassettes a trois genes identifiees RPLK et RPCC, comprenant un marqueur de resistance aux antibiotiques pour la selection positive, le marqueur de selection phenotypique lacZ ou mCherry, et le gene de contre-selection rpsL. Ces cassettes peuvent etre transformees avec une grande efficacite dans tout le genre Neisseria tout en reduisant significativement le nombre de faux positifs par rapport a des approches similaires. Ils illustrent la polyvalence et l'application de ces systemes en obtenant des souches luminescentes (knock-in) ou des mutants (knock-out) non marques chez differentes especes pathogenes et commensales du genre Neisseria, en plus de la deletion cumulative de six loci dans une seule souche de Neisseria elongata. [Traduit par la Redaction] Mots-cles: Neisseria, deletion, gene, insertion, sans marqueur